الاثنين، 8 فبراير، 2010

الاليزا

طريقة الاليزا

نتابع معا شرح طرق القياس الكيميائى كما وعدناكم من قبل وهذة المرة نشرح طريق الاليزا
ElISA ( Enzyme linked immunsorbent assay) (EIA)


احدى الطرق التى تستخدم اما لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (الطريقة المباشرة) او تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة ( الطريقة غير المباشرة )
تستخدم بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات

* قبل البدء فى شرح الطريقة يجب تذكر معلومة هامة فى علم المناعة وهى فكرة المناعة المتخصصة والتى تعتمد عليها فكرة هذة الطريقة
وهى أنة عند دخول جسم غريب الى جسم الانسان يقوم جهاز المناعة بتكوين أجسام مضادة ضد انتيجينات هذا الجسم الغريب وتظل موجودة فى الجسم فيما يسمى الذاكرة المناعية , تكون هذة الاجسام المضادة خاصة بالانتجين الذى تكونت من أجلة فقط ومن هنا تأتى الفكرة فعنما نريد أن نبحث عن انيجين معين فى عينى نأتى بالاجسام المضادة المتخصصة لة فترتبط بة والعكس صحيح


* طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa

فى الاليزا عادة نستخدم أطبافق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعاة يكون الطبق 96 ويل



فى الطريقة المباشرة نبحث عن أنتجين مجهول
2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة
4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
(antibody antigen complex) يسمى الجسم المضادالمرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد



يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع مع معقد الانتيجين والجسم المضاد
تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or tmb) يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون
Stop solutionيتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى
يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب



تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينة
ويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل concentrationوالتركيز absorbanceالعلاقة بين قوة الامتصاص
ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى
* طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa

نفس خطوات الاليزا المباشرة ولكن فى هذة الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة فتكون جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الككشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها ولعل اشهر الامثلة لهذا النوع الاليزا الخاصة بالكشف عن الاجسام المضادة بفيروس سى

.


‏هناك تعليقان (2):

  1. شكرا للمعلومات القيمه والمزيد من التالق

    ردحذف